10099-141C胎牛血清作為細胞培養(yǎng)的關(guān)鍵添加物,雖品質(zhì)穩(wěn)定,但在實際使用中常因儲存不當、操作失誤或批次差異,引發(fā)沉淀增多、細胞生長異常、污染或活性下降等問題,嚴重影響實驗重復(fù)性與數(shù)據(jù)可靠性??茖W(xué)識別
10099-141C胎牛血清問題根源并快速干預(yù),是保障細胞健康與科研進度的核心。
一、血清出現(xiàn)大量絮狀或顆粒狀沉淀
原因分析:
反復(fù)凍融導(dǎo)致脂蛋白聚集;
熱滅活后未及時冷卻;
長期4℃存放析出纖維蛋白。
解決方法:
正常沉淀(淡黃、細小、靜置后沉底)不影響使用,可直接加入培養(yǎng)基;
若需澄清,400×g離心5分鐘取上清,切勿過濾(易堵塞且損失因子);
避免反復(fù)凍融,分裝后單次使用;熱滅活后立即冰浴終止反應(yīng)。
二、細胞生長緩慢或形態(tài)異常
原因分析:
血清批次更換未驗證兼容性;
熱滅活過度破壞生長因子;
血清被支原體或內(nèi)毒素污染。
解決方法:
新批次血清先進行小規(guī)模細胞增殖測試(如MTT或計數(shù)),確認無抑制效應(yīng);
非必需不熱滅活——多數(shù)貼壁細胞系(如HEK293、HeLa)無需滅活;
若懷疑污染,送檢支原體(PCR法)或內(nèi)毒素(LAL法),Gibco10099-141C內(nèi)毒素通常<10EU/mL,符合標準。
三、培養(yǎng)基渾濁或pH迅速下降
原因分析:
血清或操作過程引入細菌/真菌污染;
血清瓶口消毒不到位。
解決方法:
立即丟棄污染培養(yǎng)物,血清剩余部分不可繼續(xù)使用;
今后操作嚴格在生物安全柜內(nèi)進行,瓶口用75%乙醇充分擦拭;
血清開瓶后建議2–4周內(nèi)用完,4℃避光保存。