酶elisa試劑盒的基本原理盒一方面是建立在抗原與抗體免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上，因而，具有特異性。而另一方面又由于酶標(biāo)記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物，它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生放大作用，正因?yàn)榇朔N放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一種既敏感又特異的方法。
ELISA的基本原理有三條：
?。?）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；
?。?）抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
?。?）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
ELISA樣本的處理：
酶elisa試劑盒的檢測(cè)目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃
注意事項(xiàng)：
1、每個(gè)樣本量收集體積=100ulx檢測(cè)種類，如果要做復(fù)孔，標(biāo)本量收集體積=100ulx檢測(cè)種類x2；
2、樣本收集后若在一周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)可保存于2-8°C，若不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)進(jìn)行分裝，凍存于-20°或-80°C，避免反復(fù)凍融
3、試劑盒的檢測(cè)范圍不等同于樣本中待測(cè)物的濃度范圍，建議實(shí)驗(yàn)前通過相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測(cè)物的濃度并通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本；
4、血清標(biāo)本采集是應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解是會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色；
5、為了保證尿液檢測(cè)的準(zhǔn)確性，必須正確收集尿液標(biāo)本和保存，收集尿液的容器必須要清潔干燥，最好使用一次性的容器，避免因用藥并清潔不到而造成的污染，尿液樣本必須新鮮，留取后，應(yīng)及時(shí)檢測(cè)或保存；
6、標(biāo)本宜在新鮮是檢測(cè)如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其中可能發(fā)生聚合，間接法ELISA中樂視本底加深；
7、反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低，所以待測(cè)樣本如需多次檢測(cè)，宜少量分裝凍存。
更新時(shí)間：2022-11-14 
瀏覽次數(shù)：889
我的位置：